Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM8 (h): sc-413655

Présentation

MCM8 code une protéine conservée de la famille « minichromosome maintenance » qui forme, avec MCM9, un complexe fonctionnel favorisant l’achèvement de la réplication de l’ADN ainsi que la réparation médiée par recombinaison homologue, en particulier lors de la reprise après un stress réplicatif. MCM8 contribue à la résection des extrémités d’ADN et au traitement des fourches de réplication bloquées ou effondrées, ce qui l’associe au maintien de la stabilité du génome pendant la phase S et dans des contextes de recombinaison méiotique. L’altération de la fonction de MCM8 a été associée à une réparation déficiente des cassures double brin, à une instabilité chromosomique accrue et à une susceptibilité aux dommages de l’ADN liés à la réplication. Des altérations génétiques de MCM8 ont été rapportées dans l’infertilité et l’insuffisance ovarienne prématurée, et elles sont également pertinentes pour des études mécanistiques de la tumorigenèse induite par des défauts des voies de réparation de l’ADN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MCM8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MCM8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MCM8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCM8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MCM8 pour l'étude de la signalisation de MCM8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MCM8 essentiels à la fonction de MCM8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MCM8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MCM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MCM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MCM8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MCM8 plasmide HDR (h) et le MCM8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MCM8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MCM8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.