MCH-1R Double Nickase Plasmid (m): sc-431527-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MCH-1R Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MCH-1R Double-Nickase-Plasmid (m) und MCH-1R Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mchr1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MCH-1R Double Nickase Plasmid (m) | sc-431527-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCH-1R Double Nickase Plasmid (m2) | sc-431527-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mchr1 kodiert den Melanin-konzentrierenden Hormonrezeptor 1 (MCH-1R), einen GPCR der Klasse A, der vor allem an Gi/o koppelt, um die cAMP-Signalübertragung, die Kalziummobilisierung und nachgeschaltete Kinasewege wie MAPK/ERK in Neuronen zu modulieren. Bei der Maus ist MCH-1R in ZNS-Schaltkreisen angereichert, die Energiebilanz, Fressverhalten, Wachheit und Belohnungsverarbeitung integrieren, wodurch die Rezeptoraktivität mit der neuroendokrinen Regulation verknüpft wird. Veränderte Mchr1-Signalübertragung wurde in Modellen untersucht, die für Adipositas, metabolische Dysregulation und neuropsychiatrische Phänotypen relevant sind; dabei tragen Veränderungen der synaptischen Erregbarkeit und des neuromodulatorischen Tonus zu systemischen Effekten bei. Als GPCR-Knotenpunkt bietet MCH-1R zudem einen gut handhabbaren Zugang, um Rezeptor-Trafficking, Desensibilisierung und pathway-biased Signaling in nativen zellulären Kontexten zu analysieren.
MCH-1R Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mchr1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mchr1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mchr1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mchr1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.