Plasmide CRISPR d'Activation (h) MC2-R: sc-402854-ACT

MC2R code le récepteur de la mélanocortine 2 (MC2-R), un récepteur couplé aux protéines G qui constitue le principal récepteur de l’hormone adrénocorticotrope (ACTH) dans le cortex surrénalien. Lors de la liaison du ligand, MC2-R se couple à Gs pour stimuler l’adénylate cyclase, augmenter l’AMPc et activer des programmes transcriptionnels dépendants de la PKA qui régulent les enzymes stéroïdogènes et la physiologie surrénalienne. L’activité de MC2R s’intègre aux voies de signalisation des mélanocortines et de biosynthèse des stéroïdes surrénaliens qui contrôlent la production de glucocorticoïdes et les réponses au stress. Un dérèglement ou une perte de fonction de MC2R est associé à une altération de la réponse à l’ACTH et à des phénotypes d’insuffisance surrénalienne, ce qui souligne sa pertinence pour la recherche en endocrinologie et sur la signalisation des RCPG.

MC2-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MC2R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MC2-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MC2R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MC2R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MC2-R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MC2R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MC2-R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MC2-R dans les cellules tumorales présentant une expression de MC2R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.