Plasmide Double Nickase (h) MC1-R: sc-402152-NIC

MC1R code le récepteur de la mélanocortine 1 (MC1-R), un récepteur couplé aux protéines G exprimé principalement dans les mélanocytes, qui régule la pigmentation et les réponses cellulaires au stress. Après liaison de peptides mélanocortines tels que l’α‑MSH, MC1‑R active la voie de signalisation Gs/adénylate cyclase, augmentant l’AMPc, ce qui stimule une transcription dépendante de MITF et oriente la mélanogenèse vers la production d’eumélanine. Cette voie s’intègre aux réponses aux dommages de l’ADN induits par les UV ainsi qu’à l’homéostasie rédox, influençant la survie des mélanocytes et la signalisation inflammatoire cutanée. Les variations génétiques et l’altération de l’activité de MC1R sont associées à des phénotypes de pigmentation et à une susceptibilité accrue aux pathologies cutanées liées aux UV, faisant de ce locus une cible largement utilisée pour des études mécanistiques en biologie des mélanocytes et en photobiologie.

MC1-R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MC1R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MC1R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MC1R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MC1R.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.