Plasmide Double Nickase (h) MBNL2: sc-401921-NIC

MBNL2 (muscleblind-like splicing regulator 2) est une protéine liant l’ARN qui reconnaît des motifs YGCY afin de contrôler l’épissage alternatif, la localisation des ARNm et leur stabilité au cours du développement et de la différenciation tissulaire. Dans le noyau, elle coordonne la sélection des sites d’épissage et contribue à des réseaux de maturation de l’ARN qui façonnent l’organisation du cytosquelette, la progression du cycle cellulaire et des programmes transcriptomiques d’adaptation au stress. MBNL2 est largement étudiée dans le contexte de la toxicité associée aux répétitions d’ARN et des mécanismes de spliceopathie, où une perturbation de l’activité de la famille MBNL entraîne des erreurs d’épissage à grande échelle. Une dérégulation de l’épissage dépendant de MBNL2 a été associée à des modèles de maladies neuromusculaires et neurodégénératives, ce qui en fait une cible clé pour disséquer les voies de traitement de l’ARN.

MBNL2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MBNL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MBNL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MBNL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MBNL2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.