Plasmide Double Nickase (h) MBD6: sc-414039-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MBD6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MBD6 Double Nickase (h) et le plasmide MBD6 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MBD6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MBD6 | sc-414039-NIC | 20 µg | $410.00 |
La protéine 6 du domaine de liaison au méthyl-CpG (MBD6) est un facteur associé à la chromatine qui reconnaît les caractéristiques de la méthylation de l’ADN et contribue à interpréter les marques épigénétiques afin de façonner les programmes transcriptionnels. Dans les cellules humaines, MBD6 est associée à la régulation de l’expression génique via le remodelage de la chromatine et le maintien d’états de chromatine répressifs, influençant des processus tels que l’identité cellulaire et la différenciation. Étant donné que le contrôle de la chromatine dépendant de la méthylation est fréquemment altéré dans le cancer et dans des phénotypes neurodéveloppementaux, perturber MBD6 offre une voie pour examiner comment les « lecteurs » épigénétiques modulent les réseaux transcriptionnels en conditions normales et dans des contextes liés aux maladies. Des études fonctionnelles de MBD6 peuvent éclairer les interactions entre la méthylation de l’ADN, les modifications des histones et les voies de stabilité du génome.
MBD6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MBD6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MBD6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MBD6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MBD6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.