Plasmide CRISPR/Cas9 KO MBD3 (m): sc-421578
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MBD3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MBD3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MBD3 Antibody (F-11): sc-166319
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MBD3 (m) | sc-421578 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Mbd3 code pour la protéine 3 contenant un domaine de liaison au méthyl-CpG (MBD3), une sous-unité centrale du complexe NuRD (remodelage des nucléosomes et désacétylation) qui associe un remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP à la désacétylation des histones afin de réguler les programmes transcriptionnels. Dans les cellules de souris, MBD3 contribue au contrôle épigénétique de la spécification des lignages, des transitions de pluripotence et de l’organisation de la chromatine couplée à la réplication en coordonnant l’accessibilité des promoteurs et des enhancers. Par la répression dépendante de NuRD et l’ajustement fin des réseaux de gènes du développement, MBD3 influence les décisions de destinée cellulaire et la stabilité du génome. Une dérégulation de l’activité MBD3/NuRD a été associée à des états de différenciation altérés et à une dérégulation transcriptionnelle, pertinentes pour des phénotypes développementaux et le remodelage épigénétique associé au cancer.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MBD3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mbd3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mbd3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mbd3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MBD3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mbd3 pour l'étude de la signalisation de MBD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Mbd3 essentiels à la fonction de MBD3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mbd3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MBD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MBD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mbd3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MBD3 plasmide HDR (m) et le MBD3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mbd3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mbd3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.