Plasmide CRISPR/Cas9 KO MBD3 (h): sc-401072

Présentation

MBD3 code pour la protéine 3 du domaine de liaison au méthyl‑CpG, un composant central du complexe NuRD (remodelage des nucléosomes et désacétylation) qui relie le remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP à la désacétylation des histones afin de réguler des programmes transcriptionnels. Contrairement à certains membres de la famille MBD, MBD3 présente une affinité limitée pour l’ADN CpG méthylé, mais il est essentiel pour cibler NuRD vers des loci génomiques spécifiques via des interactions protéine‑protéine et en fonction du contexte chromatinien. Par l’intermédiaire de NuRD, MBD3 contribue au contrôle des décisions de destinée cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et du maintien d’états de la chromatine qui influencent la prolifération et la différenciation. Une dérégulation du contrôle épigénétique associé à MBD3/NuRD a été impliquée dans des réseaux transcriptionnels aberrants observés dans le cancer, ainsi que dans une altération de la régulation des gènes du développement pertinente pour les études en neurodéveloppement et en biologie des cellules souches.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MBD3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MBD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MBD3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MBD3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MBD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MBD3 pour l'étude de la signalisation de MBD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MBD3 essentiels à la fonction de MBD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MBD3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MBD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MBD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MBD3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MBD3 plasmide HDR (h) et le MBD3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MBD3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MBD3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.