Plásmido CRISPR de Activación (h) MB67: sc-401537-ACT

NR1I3 codifica el receptor nuclear MB67 (CAR), un factor de transcripción sensible a ligandos que regula la detección de xenobióticos y las respuestas metabólicas adaptativas en células humanas. Tras su activación, MB67 forma un heterodímero con RXR y se une a elementos reguladores para controlar la expresión de enzimas y transportadores implicados en el metabolismo de fármacos, integrando vías como la biotransformación mediada por citocromo P450, las reacciones de conjugación y la homeostasis de ácidos biliares y bilirrubina. Mediante la interacción cruzada con redes de señalización inflamatoria y metabólica, NR1I3 influye en las respuestas al estrés hepatocelular y en el manejo sistémico de lípidos y glucosa. La actividad desregulada de NR1I3 se ha relacionado con la variabilidad interindividual en la respuesta a fármacos y con la susceptibilidad a fenotipos metabólicos y asociados al hígado, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de desintoxicación y de regulación endocrino‑metabólica.

MB67 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NR1I3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MB67 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NR1I3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NR1I3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MB67. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NR1I3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MB67 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MB67 en células tumorales con expresión de NR1I3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.