Plasmide Double Nickase (h) MaxiKβ: sc-403096-NIC

KCNMB1 code la sous-unité régulatrice β1 du canal potassique à grande conductance activé par le calcium et le voltage (BK/MaxiK), qui ajuste l’ouverture/fermeture du canal en augmentant la sensibilité apparente au Ca²⁺ et en modelant la repolarisation membranaire. Dans le muscle lisse humain et d’autres tissus excitables, MaxiKβ1 couple les signaux intracellulaires de Ca²⁺ à l’efflux de potassium, influençant le tonus vasculaire, la contractilité des voies aériennes et l’activité de décharge neuronale via une régulation en rétroaction du potentiel de membrane. Ce rôle modulateur relie KCNMB1 à la signalisation dépendante du Ca²⁺, au couplage électromécanique et aux voies sensibles à l’oxyde nitrique/au cGMP qui convergent vers le contrôle des canaux ioniques. Des altérations de la fonction de la sous-unité β1 des canaux BK ont été étudiées dans le contexte de la régulation de la pression artérielle, de l’hyperréactivité du muscle lisse et des troubles de l’excitabilité, faisant de KCNMB1 une cible utile pour la recherche mécanistique sur les canaux ioniques.

MaxiKβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNMB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNMB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNMB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNMB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.