Plasmide Double Nickase (h) MaxiKα: sc-402208-NIC

KCNMA1 code la sous-unité α humaine MaxiKα (BK, KCa1.1) d’un canal potassique à grande conductance, activé par le voltage et par le Ca2+, régulateur central de l’excitabilité membranaire et de la signalisation calcique intracellulaire. En couplant les augmentations de Ca2+ cytosolique et la dépolarisation à l’efflux de K+, MaxiKα module la repolarisation du potentiel d’action, la libération de neurotransmetteurs, le tonus du muscle lisse et la mécanotransduction dans de nombreux types cellulaires. La fonction du canal s’intègre aux voies de signalisation des GPCR et des kinases, et est fortement modulée par des sous-unités auxiliaires β/γ ainsi que par des microdomaines locaux de Ca2+. Une activité KCNMA1 dérégulée ou une altération du gating du canal a été associée à des phénotypes neurologiques, notamment l’épilepsie et des troubles du mouvement, ainsi qu’à des modifications fonctionnelles de la physiologie vasculaire et des voies aériennes, pertinentes pour la recherche cardiopulmonaire.

MaxiKα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNMA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNMA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNMA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNMA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.