Plásmido CRISPR de Activación (h) Max: sc-400596-ACT

El gen MAX humano codifica Max, un factor de transcripción básico hélice–bucle–hélice con cremallera de leucina que forma dímeros con MYC, MXD/MNT y otros socios relacionados para unirse a elementos de ADN tipo E-box y regular programas de expresión génica que controlan la progresión del ciclo celular, el metabolismo, la diferenciación y la apoptosis. A través de la dinámica de la red MYC–MAX y MXD–MAX, Max ayuda a equilibrar la activación frente a la represión transcripcional en procesos como la biogénesis ribosomal, la función mitocondrial y las vías de señalización del crecimiento. La alteración de MAX puede reconfigurar los circuitos transcripcionales oncogénicos y se ha implicado en cambios asociados a tumores en la expresión génica impulsada por MYC. Como cofactor nodal en la regulación transcripcional asociada a la cromatina, MAX se estudia con frecuencia en contextos de señalización proliferativa y control transcripcional específico de linaje.

Max El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Max El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Max. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Max en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Max en células tumorales con expresión de MAX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.