Particules Lentivirales d'Activation (h) MAVS: sc-400769-LAC

La MAVS humaine (protéine de signalisation antivirale associée aux mitochondries) est un adaptateur associé aux mitochondries, essentiel à la détection des ARN viraux cytosoliques et à l’initiation de la défense immunitaire innée. Lorsqu’elle est activée par RIG-I (DDX58) et MDA5 (IFIH1), MAVS assemble des complexes de signalisation de type prion qui se propagent via des voies dépendantes de TRAF afin d’activer TBK1/IKKε et le complexe IKK, aboutissant à des programmes d’expression génique d’interféron de type I et de gènes inflammatoires pilotés par IRF3/IRF7 et NF-κB. La signalisation de MAVS s’articule avec la dynamique mitochondriale, l’apoptose et les réponses au stress métabolique, reliant l’homéostasie de l’organite au remodelage transcriptionnel antiviral. Une activité dérégulée de la voie MAVS a été impliquée dans une réponse antivirale altérée, l’inflammation chronique et des mécanismes d’échappement immunitaire, pertinents pour la biologie des infections et des modèles de maladies associées à l’inflammation.

Les particules d'activation lentivirales MAVS (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MAVS dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MAVS (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MAVS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MAVS. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MAVS ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.