Plasmide CRISPR/Cas9 KO matrin-3 (h): sc-418085

Présentation

MATR3 code la matrin-3, une protéine de la matrice nucléaire liant l’ARN et l’ADN, qui s’associe à la lamina nucléaire et à la chromatine afin de soutenir l’architecture du noyau et l’organisation du génome. La matrin-3 participe au traitement de l’ARN, notamment à l’épissage du pré-ARNm, à la stabilisation de l’ARNm et à la régulation de l’expression génique via des interactions avec des complexes ribonucléoprotéiques. Ses fonctions recoupent des voies impliquées dans l’organisation nucléocytoplasmique, les réponses aux dommages de l’ADN et la dynamique des granules de stress, reliant ainsi MATR3 à la protéostasie et à l’homéostasie de l’ARN dans les neurones. Une dérégulation ou des mutations de MATR3 ont été associées à des phénotypes neurodégénératifs, notamment aux troubles du spectre SLA/DFT, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des dysfonctions des protéines liant l’ARN et des anomalies de la structure nucléaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO matrin-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MATR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MATR3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MATR3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine matrin-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MATR3 pour l'étude de la signalisation de matrin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MATR3 essentiels à la fonction de matrin-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MATR3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le matrin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le matrin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MATR3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le matrin-3 plasmide HDR (h) et le matrin-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MATR3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MATR3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.