Plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCKS (h): sc-400837

Présentation

MARCKS (substrat de la C‑kinase riche en alanine et myristoylé) est une protéine associée à la membrane, régulatrice de l’actine, qui constitue un substrat majeur de la protéine kinase C et module la disponibilité du phosphatidylinositol 4,5‑bisphosphate (PIP2) à la membrane plasmique. Grâce à un cycle dépendant de la phosphorylation entre les compartiments membranaires et cytosquelettiques, MARCKS influence l’organisation des filaments d’actine, la forme cellulaire, l’adhésion, la motilité, le trafic vésiculaire et la croissance des neurites. MARCKS participe à des réseaux de signalisation liés à PKC, à la régulation par le calcium/calmoduline et à la dynamique des phosphoinositides, qui coordonnent le remodelage du cytosquelette et la signalisation membranaire. Une expression ou une phosphorylation dérégulées de MARCKS ont été associées à des phénotypes de migration et d’invasion altérés, et MARCKS a été étudiée notamment dans des contextes tels que la biologie du cancer, les processus de neurodéveloppement et la signalisation inflammatoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCKS (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MARCKS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MARCKS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MARCKS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MARCKS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MARCKS pour l'étude de la signalisation de MARCKS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MARCKS essentiels à la fonction de MARCKS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MARCKS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MARCKS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MARCKS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MARCKS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MARCKS plasmide HDR (h) et le MARCKS (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MARCKS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MARCKS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.