MARCKS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400837

Visão geral

MARCKS (substrato C-quinase rico em alanina miristoilado) é uma proteína associada à membrana que regula a actina, atuando como um importante substrato da proteína quinase C e modulando a disponibilidade de fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP2) na membrana plasmática. Por meio de um ciclo dependente de fosforilação entre os compartimentos de membrana e do citoesqueleto, o MARCKS influencia a organização dos filamentos de actina, a forma celular, a adesão, a motilidade, o tráfego vesicular e o crescimento de neuritos. O MARCKS participa de redes de sinalização ligadas à PKC, à regulação por cálcio/calmodulina e à dinâmica dos fosfoinositídeos, que coordenam a remodelação do citoesqueleto e a sinalização de membrana. A expressão ou fosforilação desregulada de MARCKS tem sido associada a fenótipos alterados de migração e invasão e foi estudada em contextos que incluem biologia do câncer, processos de neurodesenvolvimento e sinalização inflamatória.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MARCKS (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MARCKS em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MARCKS, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MARCKS na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MARCKS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MARCKS para a investigação da sinalização de MARCKS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MARCKS críticos para a função MARCKS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MARCKS para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MARCKS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MARCKS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MARCKS. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MARCKS Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MARCKS (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MARCKS para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MARCKS definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.