Plásmido CRISPR de Activación (h) MAPKAP-1: sc-404288-ACT

MAPKAP1 codifica MAPKAP-1 (también conocida como mSIN1), un componente esencial del complejo 2 de la diana mecanística de la rapamicina (mTORC2) que ayuda a determinar el ensamblaje del complejo, la selectividad de sustratos y la localización subcelular. A través de mTORC2, MAPKAP-1 favorece la fosforilación de quinasas de la familia AGC como AKT (Ser473), SGK y PKC, conectando la señalización de factores de crecimiento con la supervivencia celular, el metabolismo, la remodelación del citoesqueleto y la migración. La señalización dependiente de MAPKAP1 se cruza con las redes PI3K–AKT–mTOR, que con frecuencia se encuentran alteradas en la biología del cáncer y en la desregulación metabólica. Los cambios en la expresión de MAPKAP1 o en la actividad de la vía se han asociado con modificaciones de la capacidad proliferativa, las respuestas al estrés y fenotipos invasivos en diversos contextos celulares.

MAPKAP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPKAP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAPKAP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPKAP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPKAP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAPKAP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPKAP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAPKAP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAPKAP-1 en células tumorales con expresión de MAPKAP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.