Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAP-4: sc-402572-ACT

MAP4 code la protéine 4 associée aux microtubules (MAP‑4), un régulateur du cytosquelette exprimé de façon ubiquitaire, qui se lie aux microtubules et les stabilise afin de contrôler leur dynamique pendant l’interphase et la mitose. En modulant la polymérisation des microtubules, MAP‑4 influence le trafic intracellulaire, la polarité cellulaire et l’organisation du fuseau mitotique, affectant ainsi la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress. Une expression altérée de MAP4 et le remodelage des microtubules sont associés à des phénotypes prolifératifs et à l’instabilité chromosomique, et ont été étudiés dans le contexte de la biologie du cancer et du remodelage tissulaire. MAP‑4 est également utilisée comme nœud mécanistique pour étudier la signalisation dépendante du cytosquelette et le positionnement des organites dans les cellules humaines.

MAP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAP-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAP-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAP-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.