Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAO-A (h): sc-401030

Présentation

Le gène humain **MAOA** code la monoamine oxydase A (MAO-A) de la membrane externe mitochondriale, une enzyme flavino-dépendante qui catalyse la désamination oxydative des amines biogènes, notamment la sérotonine, la noradrénaline et la dopamine. En régulant le catabolisme des monoamines, la MAO-A influence l’homéostasie des neurotransmetteurs, l’équilibre rédox mitochondrial et des réseaux de signalisation en aval liés aux réponses cellulaires au stress. L’activité de la MAO-A contribue à des voies affectant la production d’espèces réactives de l’oxygène et le métabolisme des aldéhydes, reliant le renouvellement des monoamines au stress oxydant et à l’adaptation métabolique. Des altérations de l’expression ou de la fonction de **MAOA** ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et à des troubles impliquant une dérégulation de la signalisation monoaminergique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des systèmes cellulaires neuronaux et périphériques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAO-A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAOA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAOA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAOA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAO-A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAOA pour l'étude de la signalisation de MAO-A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAOA essentiels à la fonction de MAO-A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAOA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAO-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MAO-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAOA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAO-A plasmide HDR (h) et le MAO-A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAOA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAOA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.