Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAMDC4: sc-414780-ACT

Le gène humain MAMDC4 (MAM domain containing 4) code une protéine associée à la membrane, caractérisée par des domaines MAM impliqués dans les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. L’expression de MAMDC4 a été associée à la différenciation épithéliale et à des processus liés à la polarité, ce qui concorde avec un rôle dans l’organisation des réseaux de signalisation et d’adhérence à proximité de la membrane. Des niveaux dérégulés de MAMDC4 ont été rapportés dans plusieurs contextes pathologiques, notamment dans des programmes transcriptionnels associés au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier comment des états épithéliaux altérés influencent la prolifération, la migration et l’organisation tissulaire. En tant que facteur de surface et proche des jonctions, MAMDC4 est fréquemment étudié dans des modèles de biologie des barrières et de plasticité phénotypique des cellules tumorales.

MAMDC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAMDC4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAMDC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAMDC4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAMDC4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAMDC4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAMDC4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAMDC4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAMDC4 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAMDC4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.