MAMDC4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-414780-ACT

Humanes MAMDC4 (MAM-Domäne enthaltend 4) kodiert ein membranassoziiertes Protein, das durch MAM-Domänen charakterisiert ist, die an Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen beteiligt sind. Die Expression von MAMDC4 wurde mit epithelialer Differenzierung und polarisationsassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht, was mit Funktionen bei der Organisation membrannaher Signal- und Adhäsionsnetzwerke übereinstimmt. Dysregulierte MAMDC4-Spiegel wurden in mehreren Krankheitskontexten berichtet, einschließlich krebsassoziierter Transkriptionsprogramme, wodurch das Gen für die Untersuchung relevant ist, wie veränderte epitheliale Zustände Proliferation, Migration und Gewebeorganisation beeinflussen. Als oberflächen- und junction-naher Faktor wird MAMDC4 häufig in Modellen der Barrierebiologie und der phänotypischen Plastizität von Tumorzellen untersucht.

MAMDC4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAMDC4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAMDC4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAMDC4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAMDC4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAMDC4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAMDC4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAMDC4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAMDC4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAMDC4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.