MAGI-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402283

Übersicht

MAGI1 kodiert MAGI-1, ein membranassoziiertes Scaffold-Protein der Guanylatkinase-Familie (MAGUK), das an Tight Junctions und anderen Zell-Zell-Kontaktstellen angereichert ist und dort multiproteinäre Signalgebungskomplexe organisiert. Durch die Bindung von Junction-Komponenten und Signal-Effektoren über PDZ- und WW-Domänen trägt MAGI-1 dazu bei, die epitheliale Polarität, die Stabilität von Adherens- und Tight Junctions sowie die räumliche Regulation von Signalwegen zu koordinieren, die mit Zytoskelett-Remodeling und Signaltransduktion verknüpft sind. Eine veränderte MAGI1-Expression oder junctionale Lokalisierung wurde mit einer Störung der Barrierefunktion und aberranten Programmen der Zellmigration in Zusammenhang gebracht – Prozesse, die häufig in der Krebsbiologie und beim entzündlichen Gewebeumbau untersucht werden. MAGI-1 wird außerdem als Knotenpunkt genutzt, um das Cross-Talk zwischen junctionaler Architektur und wachstumsfaktor-abhängigen Signalnetzwerken zu untersuchen.

Das MAGI-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MAGI1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MAGI1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MAGI1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MAGI-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MAGI1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MAGI-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MAGI1-Exone abzielen, die für die MAGI-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MAGI1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MAGI-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MAGI-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MAGI1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MAGI-1 HDR-Plasmid (h) und MAGI-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MAGI1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MAGI1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.