Plasmide Double Nickase (h) MAGE-D4: sc-418394-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MAGE-D4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MAGE-D4 Double Nickase (h) et le plasmide MAGE-D4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MAGED4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MAGE-D4/MAGE-D4B Antibody (E-7): sc-393203
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MAGE-D4 | sc-418394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MAGE-D4 | sc-418394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAGED4 code l’antigène de mélanome de la famille D, membre 4 (MAGE-D4), une protéine associée aux antigènes cancer/testis impliquée dans la régulation des programmes de croissance cellulaire et de la signalisation adaptative au stress. Les protéines MAGE peuvent agir comme modulateurs du renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine via des interactions avec des ligases E3 de l’ubiquitine, influençant ainsi la stabilité des protéines, le contrôle transcriptionnel et la progression du cycle cellulaire. Une expression aberrante de MAGED4 a été rapportée dans de multiples types tumoraux et est fréquemment étudiée dans le contexte du remodelage des voies oncogéniques, de la prolifération et de la capacité d’adaptation des cellules tumorales. En tant que membre d’une famille d’antigènes humains, MAGE-D4 est également pertinent pour l’étude de l’expression génique associée aux tumeurs et du profilage moléculaire lié à l’immunité dans des systèmes modèles.
MAGE-D4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAGED4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAGED4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAGED4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAGED4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.