Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGE-C2 (h): sc-405516

Présentation

MAGEC2 code pour l’antigène associé au mélanome C2 (MAGE‑C2), un antigène « cancer‑testis » dont l’expression est restreinte aux tissus germinaux normaux et qui est fréquemment réexprimé dans divers types de tumeurs. MAGE‑C2 participe à l’homéostasie protéique en mobilisant des processus dépendants de l’ubiquitine, notamment via la modulation de l’activité des ligases E3 grâce à des interactions avec des partenaires contenant un domaine RING, influençant ainsi la stabilité de régulateurs de la signalisation et du cycle cellulaire. Une expression dérégulée de MAGE‑C2 a été associée à des altérations de la prolifération, des réponses au stress et de programmes transcriptionnels liés à la progression maligne et à la reconnaissance immunitaire. En tant qu’antigène associé aux tumeurs, il est largement étudié dans le contexte de la présentation antigénique et comme corrélat moléculaire du phénotype tumoral et du remaniement des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGE-C2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAGEC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAGEC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAGEC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAGE-C2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAGEC2 pour l'étude de la signalisation de MAGE-C2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAGEC2 essentiels à la fonction de MAGE-C2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAGEC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAGE-C2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MAGE-C2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAGEC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAGE-C2 plasmide HDR (h) et le MAGE-C2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAGEC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAGEC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.