Plasmide Double Nickase (h) MAG: sc-401604-NIC

La glycoprotéine associée à la myéline (MAG) est une protéine de surface cellulaire de type immunoglobuline, capable de se lier à l’acide sialique, et particulièrement abondante dans les cellules gliales myélinisantes, où elle médie l’adhérence axone–glie et stabilise les interactions myéline–axone. MAG se lie à des ligands glycanes et contribue à des voies de signalisation qui influencent l’organisation du cytosquelette, l’extension des neurites et le maintien de l’intégrité axonale au cours du développement du système nerveux et de l’homéostasie à l’âge adulte. Dans les cellules humaines, les processus associés à MAG recoupent des voies qui régissent la structure de la myéline, le transport axonal et la réponse aux lésions neuronales. Une expression ou une signalisation de MAG dérégulée a été impliquée dans des physiopathologies démyélinisantes et neurodégénératives, ainsi que dans des mécanismes limitant la régénération axonale, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques en neurobiologie.

MAG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.