Plasmide Double Nickase (h) MAfF: sc-411785-NIC

MAFF code pour MAfF, un facteur de transcription de la famille des petites Maf à domaine basique « leucine zipper » (bZIP), dépourvu de domaine d’activation transcriptionnelle canonique et fonctionnant généralement comme partenaire de dimérisation obligatoire pour les protéines CNC et d’autres bZIP. Par hétérodimérisation avec des facteurs tels que NFE2L2/NRF2, MAfF contribue à la régulation de la transcription dépendante des éléments de réponse antioxydante (ARE) et intègre des programmes cellulaires contrôlant l’homéostasie redox, le métabolisme des xénobiotiques et la signalisation inflammatoire. L’activité de MAfF est donc associée à l’adaptation au stress oxydatif et à la reprogrammation transcriptionnelle dans des contextes incluant la dérégulation métabolique et la biologie tumorale. Une expression altérée de MAFF a été rapportée dans plusieurs situations pertinentes pour la maladie, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud pour disséquer les réseaux de réponse au stress et les circuits de régulation génique en aval.

MAfF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAFF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAFF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAFF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAFF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.