Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAFbx (h): sc-400908

Présentation

FBXO32 code la protéine humaine d’atrophie musculaire de type F-box MAFbx (également appelée Atrogin-1), un composant de la ligase E3 ubiquitine SCF (SKP1–CUL1–F-box) qui confère la spécificité de substrat pour la dégradation protéasomale dépendante de l’ubiquitine. MAFbx est fortement induite lors des états cataboliques et contribue au remodelage de la protéostasie en ciblant des régulateurs de la différenciation et de la croissance musculaires, ce qui la relie à des voies situées en aval des facteurs de transcription FOXO, de la signalisation IGF-1/AKT et des réponses au stress cellulaire. Par son rôle dans l’activité du système ubiquitine–protéasome, FBXO32 est largement étudié dans les contextes de fonte et de remodelage musculaires, notamment l’atrophie associée à la cachexie et la perte musculaire liée à l’inactivité. Une activité altérée de FBXO32/MAFbx est également pertinente pour comprendre l’adaptation du muscle squelettique, le stress métabolique et les signaux inflammatoires qui convergent vers le renouvellement des protéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAFbx (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FBXO32 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FBXO32, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FBXO32 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAFbx.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FBXO32 pour l'étude de la signalisation de MAFbx, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FBXO32 essentiels à la fonction de MAFbx
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FBXO32 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAFbx plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MAFbx plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FBXO32. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAFbx plasmide HDR (h) et le MAFbx (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FBXO32 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FBXO32 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.