Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
MAD2B Plasmide Double Nickase (m): sc-428124-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MAD2B Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MAD2B Double Nickase Plasmid (m) e il MAD2B Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mad2l2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MAD2B Antibody (14): sc-135977
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MAD2B Plasmide Double Nickase (m) | sc-428124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MAD2B Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mad2l2 (MAD2B/REV7) codifica una proteina contenente un dominio HORMA che svolge un ruolo nel mantenimento del genoma coordinando la tolleranza al danno del DNA e la scelta della via di riparazione. Nelle cellule dei mammiferi, MAD2B è una subunità chiave della DNA polimerasi ζ, supportando la sintesi di DNA per translesione, e partecipa anche alla regolazione della riparazione delle rotture a doppio filamento tramite interazioni con fattori che influenzano la resezione delle estremità e la selezione della via. Oltre alla riparazione, MAD2B è stato associato al controllo del ciclo cellulare e a processi legati al checkpoint mitotico attraverso interazioni con regolatori dell’APC/C, collegando le risposte allo stress replicativo alla segnalazione proliferativa. La deregolazione delle reti di riparazione e di checkpoint dipendenti da MAD2B è rilevante per i meccanismi alla base dell’instabilità genomica, una caratteristica distintiva studiata nella biologia dei tumori e in altri disturbi dell’integrità del genoma.
MAD2B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mad2l2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mad2l2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mad2l2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mad2l2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.