Plásmido Doble Nickase (m) MAD2B: sc-428124-NIC

Mad2l2 (MAD2B/REV7) codifica una proteína con dominio HORMA que participa en el mantenimiento del genoma al coordinar la tolerancia al daño del ADN y la elección de vías de reparación. En células de mamífero, MAD2B es una subunidad clave de la ADN polimerasa ζ, apoyando la síntesis de ADN por translesión, y también participa en la regulación de la reparación de roturas de doble cadena mediante interacciones con factores que influyen en la resección de extremos y en la selección de la vía. Más allá de la reparación, MAD2B se ha vinculado al control del ciclo celular y a procesos asociados al punto de control mitótico a través de interacciones con reguladores del APC/C, conectando las respuestas al estrés replicativo con la señalización proliferativa. La desregulación de las redes de reparación y de puntos de control dependientes de MAD2B es relevante para los mecanismos que subyacen a la inestabilidad genómica, un rasgo distintivo estudiado en biología del cáncer y en otros trastornos de la integridad genómica.

MAD2B El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mad2l2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mad2l2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mad2l2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mad2l2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.