Plasmide Double Nickase (h2) MAD2B: sc-404007-NIC-2

Le gène humain MAD2L2 code MAD2B (également appelé REV7), une protéine à domaine HORMA qui régule la stabilité du génome en participant à la synthèse d’ADN trans-lésionnelle via l’ADN polymérase ζ et en coordonnant la tolérance aux dommages de l’ADN lors du stress réplicatif. MAD2B agit aussi au sein du complexe Shieldin pour orienter le choix de la voie de réparation des cassures double brin, en favorisant la jonction d’extrémités non homologues et en limitant la résection des extrémités de l’ADN, façonnant ainsi les réponses cellulaires aux agressions génotoxiques. Par ces fonctions, MAD2L2 influence le contrôle des points de contrôle, la réparation associée à la réplication et le recrutement de facteurs de réparation associés à la chromatine, des processus fréquemment perturbés dans le cancer et d’autres troubles liés à des défauts de réparation de l’ADN. Les outils de recherche sur MAD2L2/MAD2B soutiennent des études mécanistiques de la mutagenèse, la cartographie des interactions de létalité synthétique et l’exploration fonctionnelle du biais entre voies de réparation dans l’édition génétique et les essais de maintenance du génome.

MAD2B Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAD2L2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAD2L2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAD2L2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAD2L2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.