Plasmide Double Nickase (h) Mad 1: sc-401812-NIC

MXD1 code pour Mad1, un facteur de transcription de type hélice‑boucle‑hélice basique à fermeture éclair à leucines, qui forme un hétérodimère avec MAX pour se lier aux éléments E‑box et réprimer la transcription induite par MYC. Via le recrutement de complexes corépresseurs SIN3/HDAC, Mad1 favorise des programmes de silenciation transcriptionnelle liés au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation et à l’apoptose, contrebalançant l’activité proliférative du dimère MYC–MAX. Une régulation altérée du réseau MXD1–MYC a été associée à une dérégulation des signaux de croissance et à des défauts d’engagement de lignée observés dans de multiples contextes cancéreux, faisant de MXD1 un nœud utile pour étudier les circuits transcriptionnels oncogéniques. La fonction de Mad1 est également pertinente pour les études du remodelage de la chromatine et de la répression transcriptionnelle dépendante des signaux.

Mad 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MXD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MXD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MXD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MXD1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.