Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mad 1: sc-401812-ACT

Le gène humain **MXD1** code Mad1, un facteur de transcription à fermeture éclair leucine de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH-LZ) qui forme des hétérodimères avec **MAX** afin d’antagoniser l’expression génique induite par **MYC**. En se liant aux éléments **E-box** et en recrutant des complexes de co‑répresseurs, Mad1 contribue à des programmes de répression transcriptionnelle qui favorisent la différenciation, limitent la prolifération et influencent la progression du cycle cellulaire ainsi que l’apoptose. MXD1 s’inscrit dans le réseau régulateur **MYC/MAX/MXD**, qui intègre les signaux mitogènes au contrôle de la chromatine et de la transcription. Le dérèglement de cet axe est fréquemment impliqué en cancérologie, ce qui fait de MXD1 un nœud utile pour étudier les circuits transcriptionnels oncogéniques et les états de différenciation spécifiques de lignée.

Mad 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MXD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mad 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MXD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MXD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mad 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MXD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mad 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mad 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MXD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.