mAChR M5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402943

Descripción general

CHRM5 codifica el receptor muscarínico de acetilcolina M5 (mAChR M5), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, la producción de fosfato de inositol, la movilización de Ca2+ intracelular y las vías dependientes de PKC. A través de estas cascadas de segundos mensajeros, el mAChR M5 modula la excitabilidad neuronal, la señalización sináptica y el tono vascular, y puede activar la señalización MAPK/ERK con efectos posteriores sobre programas de expresión génica. CHRM5 se expresa en poblaciones celulares neurales y periféricas discretas, donde la regulación colinérgica se intersecta con los circuitos dopaminérgicos y la regulación neurovascular. La señalización muscarínica desregulada se ha implicado en fenotipos neuropsiquiátricos y neurológicos, lo que respalda el uso de modelos de perturbación de CHRM5 para dilucidar las contribuciones de la vía colinérgica a procesos celulares relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO mAChR M5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CHRM5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CHRM5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CHRM5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína mAChR M5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CHRM5 para la investigación de la señalización de mAChR M5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CHRM5 críticos para la función de mAChR M5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CHRM5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido mAChR M5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido mAChR M5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CHRM5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR mAChR M5 (h) y el plásmido HDR mAChR M5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CHRM5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CHRM5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.