Plasmide Double Nickase (h) mAChR M4: sc-402318-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) mAChR M4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide mAChR M4 Double Nickase (h) et le plasmide mAChR M4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CHRM4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) mAChR M4 | sc-402318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) mAChR M4 | sc-402318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM4 code le récepteur muscarinique de l’acétylcholine humain M4 (mAChR M4), un RCPG couplé à Gi/o qui inhibe l’adénylate cyclase, réduit l’AMPc intracellulaire et module l’activité des canaux ioniques afin de façonner l’excitabilité neuronale et la transmission synaptique. La signalisation du mAChR M4 s’articule avec les circuits cholinergiques et dopaminergiques et influence des voies en aval telles que AMPc/PKA et MAPK/ERK, contribuant à la régulation de la libération des neurotransmetteurs et de la plasticité. Une expression altérée de CHRM4 ou un dysfonctionnement du récepteur a été impliqué dans la biologie de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, notamment via des mécanismes pertinents pour la schizophrénie, les circuits de la maladie de Parkinson et des comportements liés à l’usage de substances. Ces caractéristiques font de CHRM4 une cible utile pour disséquer la signalisation des RCPG, la neuromodulation à l’échelle des réseaux, ainsi que des phénotypes transcriptionnels et électrophysiologiques dépendants des récepteurs dans des systèmes modèles humains.
mAChR M4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRM4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRM4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRM4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRM4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.