Plásmido CRISPR de Activación (h) mAChR M4: sc-402318-ACT

CHRM4 codifica el receptor muscarínico de acetilcolina humano M4 (mAChR M4), un GPCR acoplado a Gi/o que modula la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica al inhibir la adenilil ciclasa, reducir la señalización de AMPc y regular la actividad de los canales iónicos. M4 participa en las vías de neurotransmisión colinérgica y moldea la salida de los circuitos dopaminérgicos mediante mecanismos de señalización presinápticos y postsinápticos. Entre los efectos aguas abajo se incluyen la modulación de la señalización MAPK/ERK, la dinámica del calcio y la liberación de neurotransmisores, vinculando la actividad de CHRM4 con el control, a nivel de red, de procesos motores y cognitivos. Las alteraciones en la señalización de receptores muscarínicos y la desregulación de circuitos asociada a CHRM4 se han estudiado en investigación sobre trastornos neuropsiquiátricos y del movimiento, incluidos contextos relevantes para la esquizofrenia, los circuitos parkinsonianos y fenotipos relacionados con el consumo de sustancias.

mAChR M4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRM4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mAChR M4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRM4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRM4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mAChR M4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRM4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mAChR M4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mAChR M4 en células tumorales con expresión de CHRM4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.