Plasmide CRISPR/Cas9 KO mAChR M2 (h): sc-402394
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- mAChR M2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique mAChR M2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: mAChR M2 Antibody (M2-2-B3): sc-33712
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO mAChR M2 (h) | sc-402394 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CHRM2 code le sous-type M2 du récepteur muscarinique de l’acétylcholine (mAChR M2), un RCPG couplé à Gi/o qui atténue l’activité de l’adénylate cyclase afin de réduire l’AMPc intracellulaire et la signalisation en aval via la PKA. Le mAChR M2 module également la conductance des canaux ioniques, influençant l’excitabilité membranaire et la libération de neurotransmetteurs dans les circuits neuronaux, et régule les réponses chronotropes et inotropes dans les cardiomyocytes. Par ces mécanismes, CHRM2 participe à la neurotransmission cholinergique, au contrôle autonome et à des réseaux de signalisation plus larges dépendants des RCPG. Une signalisation muscarinique dérégulée a été associée, dans des contextes de recherche, à des phénotypes d’électrophysiologie cardiaque ainsi qu’à des processus neuropsychiatriques et cognitifs, faisant de CHRM2 un nœud utile pour l’exploration des voies de signalisation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mAChR M2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHRM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHRM2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHRM2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mAChR M2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHRM2 pour l'étude de la signalisation de mAChR M2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CHRM2 essentiels à la fonction de mAChR M2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHRM2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le mAChR M2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le mAChR M2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHRM2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le mAChR M2 plasmide HDR (h) et le mAChR M2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHRM2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHRM2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.