Plasmide Double Nickase (h) M-Ras: sc-405471-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) M-Ras correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide M-Ras Double Nickase (h) et le plasmide M-Ras Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MRAS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: M-Ras Antibody (C-8): sc-518225
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) M-Ras | sc-405471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) M-Ras | sc-405471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MRAS code M-Ras, une petite GTPase de la superfamille RAS qui agit comme un interrupteur moléculaire reliant les signaux extracellulaires à la signalisation intracellulaire. À l’état lié au GTP, M-Ras recrute des effecteurs qui convergent avec les voies MAPK/ERK et apparentées à PI3K, influençant la prolifération cellulaire, la différenciation, l’adhésion et l’organisation du cytosquelette. L’activité de MRAS intègre des signalisations déclenchées par les récepteurs et contribue à une régulation dépendante du contexte de processus développementaux et liés à l’immunité. La dérégulation de la signalisation de la famille RAS est largement impliquée dans des mécanismes oncogéniques et neurodéveloppementaux, ce qui fait de MRAS un nœud utile pour l’analyse des voies de signalisation dans des modèles de cellules humaines.
M-Ras Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MRAS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MRAS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MRAS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MRAS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.