M-cadherin Double Nickase Plasmid (h): sc-401232-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das M-cadherin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- M-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h) und M-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDH15 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: M-cadherin: sc-398107
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
M-cadherin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401232-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
M-cadherin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401232-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **CDH15** kodiert **M-Cadherin**, ein calciumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsmolekül, das in Skelettmuskel und Satellitenzellen angereichert ist und dort während der myogenen Differenzierung die Erkennung, Adhäsion und Fusion von Myoblasten unterstützt. Über den Aufbau von Adherens Junctions sowie die Kopplung an Catenine und das Aktin-Zytoskelett trägt M-Cadherin zur Koordination von Zellpolarität, Gewebearchitektur und mechanotransduktiven Programmen bei, die die Muskelregeneration beeinflussen. Die von CDH15 abhängige Adhäsionsdynamik überschneidet sich mit Signalwegen, die den Umbau des Zytoskeletts und die Entwicklungsmusterung regulieren, was CDH15 für Studien zur Myogenese und Muskelreparatur relevant macht. Veränderte cadherinvermittelte Adhäsion wurde mit neuromuskulären und entwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten untersucht, in denen Zell-Zell-Kontakt Migration, Differenzierung und Gewebeintegrität steuert.
M-cadherin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDH15-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDH15 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDH15-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDH15-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.