Plasmide Double Nickase (h) M-cadherin: sc-401232-NIC

Le gène humain CDH15 code la M‑cadhérine, une molécule d’adhésion cellule‑cellule dépendante du calcium, enrichie dans le muscle squelettique et les cellules satellites, où elle favorise la reconnaissance, l’adhésion et la fusion des myoblastes au cours de la différenciation myogénique. En participant à l’assemblage des jonctions d’adhérence et à leur couplage aux caténines et au cytosquelette d’actine, la M‑cadhérine contribue à coordonner la polarité cellulaire, l’architecture tissulaire et les programmes de mécanotransduction qui influencent la régénération musculaire. Les dynamiques d’adhésion associées à CDH15 croisent des voies régulant le remodelage du cytosquelette et l’organisation du développement, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la myogenèse et de la réparation musculaire. Des altérations de l’adhésion médiée par les cadhérines ont été associées à des phénotypes neuromusculaires et du développement, et sont fréquemment examinées dans des contextes où le contact cellule‑cellule gouverne la migration, la différenciation et l’intégrité des tissus.

M-cadherin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDH15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDH15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDH15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDH15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.