Plasmide Double Nickase (h) LysRS: sc-404110-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LysRS correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LysRS Double Nickase (h) et le plasmide LysRS Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KARS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LysRS Antibody (A-10): sc-271331
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LysRS | sc-404110-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LysRS | sc-404110-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KARS code la lysyl‑ARNt synthétase humaine (LysRS), une aminoacyl‑ARNt synthétase de classe II qui ligature la lysine à son ARNt^Lys cognat, garantissant la fidélité de la traduction et contribuant à l’homéostasie du protéome. Au‑delà de son rôle canonique dans la synthèse protéique cytosolique, LysRS a été impliquée dans des processus liés à la signalisation via une localisation régulée et des interactions protéine–protéine reliant la traduction aux réponses cellulaires au stress. Une perturbation de la fonction des aminoacyl‑ARNt synthétases peut modifier la protéostasie, la signalisation intégrée du stress et des programmes d’état cellulaire fréquemment étudiés dans des modèles de neurodéveloppement, de neurodégénérescence et de biologie du cancer. Une activité ou une expression de KARS dérégulée est également pertinente pour la coordination mitochondrie–cytosol de l’expression génique et l’adaptation métabolique, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des mécanismes centrés sur la traduction.
LysRS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KARS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KARS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KARS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KARS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.