LysRS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404110-ACT

KARSはヒトのリシルtRNA合成酵素（LysRS）をコードしており、tRNA^Lys にリシンを結合（アミノアシル化）させることで翻訳の忠実性と効率的なタンパク質合成を担う、細胞質の中核酵素である。アミノ酸の利用可能性をリボソーム機能へと結び付けることで、LysRSはプロテオスタシスや統合ストレス応答に寄与し、さらにストレスへの細胞適応を調整する非カノニカルなシグナル伝達機能への関与も示唆されている。アミノアシルtRNA合成酵素活性の変化は、神経発達・神経変性の表現型、末梢神経障害、ならびにミトコンドリア／翻訳関連疾患と関連づけられており、KARSは遺伝子型—表現型の関係を検討する上で重要な結節点となる。そのためKARSは、翻訳制御、細胞増殖の調節、ストレス関連経路の機序研究で広く用いられている。

LysRS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KARSの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LysRS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KARS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKARS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LysRSの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKARS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLysRS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKARS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLysRS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。