Plasmide CRISPR d'Activation (h) LYRM4: sc-412759-ACT

LYRM4 humain (« LYR motif containing 4 »), également appelé ISD11, est une protéine de la matrice mitochondriale qui agit comme cofacteur essentiel du complexe NFS1 cystéine désulfurase, indispensable à la biogenèse des centres fer–soufre (Fe–S). En stabilisant la machinerie centrale de transfert du soufre et en soutenant l’assemblage des centres Fe–S dépendant de protéines échafaudages, LYRM4 contribue au maintien de l’activité d’enzymes Fe–S–dépendantes impliquées dans la phosphorylation oxydative, la traduction mitochondriale et l’homéostasie rédox. Une perturbation ou une insuffisance de cette voie peut altérer la fonction de la chaîne respiratoire, accroître le stress oxydant et compromettre le métabolisme énergétique cellulaire, reliant ainsi la dysfonction mitochondriale associée à LYRM4 à des mécanismes de maladies neurométaboliques. En conséquence, LYRM4 est fréquemment étudié dans le contexte du contrôle qualité mitochondrial, de l’adaptation métabolique et des relations génotype–phénotype dans les défauts d’assemblage des centres Fe–S.

LYRM4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LYRM4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LYRM4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LYRM4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LYRM4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LYRM4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LYRM4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LYRM4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LYRM4 dans les cellules tumorales présentant une expression de LYRM4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.