Plasmide CRISPR/Cas9 KO LYPLA3 (h): sc-409535

Présentation

PLA2G15 code LYPLA3, une phospholipase/désacylase lysosomale impliquée dans le renouvellement des phospholipides et le remodelage des lipides membranaires via l’hydrolyse des chaînes d’acides gras. En contribuant au catabolisme lysosomal des lipides, LYPLA3 s’inscrit au carrefour de voies qui régulent le trafic endolysosomal, la dégradation liée à l’autophagie et l’homéostasie lipidique cellulaire. Une altération du traitement lysosomal des lipides est largement pertinente dans les réponses au stress métabolique et peut influencer la signalisation inflammatoire ainsi que la fonction des organites, faisant de LYPLA3 un point d’entrée utile pour étudier des perturbations d’origine lipidique dans les cellules humaines. L’étude fonctionnelle de LYPLA3 soutient des travaux mécanistiques sur le métabolisme lipidique et les processus centrés sur le lysosome, fréquemment modifiés dans des états cellulaires associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LYPLA3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLA2G15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLA2G15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLA2G15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LYPLA3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLA2G15 pour l'étude de la signalisation de LYPLA3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLA2G15 essentiels à la fonction de LYPLA3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLA2G15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LYPLA3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LYPLA3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLA2G15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LYPLA3 plasmide HDR (h) et le LYPLA3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLA2G15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLA2G15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.