Lyl-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405421-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Lyl-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Lyl-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Lyl-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LYL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Lyl-1: sc-374164
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Lyl-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405421-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lyl-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405421-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LYL1 kodiert Lyl-1, einen basischen Helix-Loop-Helix-(bHLH)-Transkriptionsfaktor, der an genregulatorischen Programmen beteiligt ist, welche die Erhaltung hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen sowie die Festlegung von Zelllinien steuern. Lyl-1 wirkt im Zellkern, indem es an E-Box-Motive bindet und gemeinsam mit anderen bHLH-Faktoren transkriptionelle Netzwerke koordiniert; dadurch beeinflusst es Differenzierung, Zellzykluskontrolle und Überlebenssignale in hämatopoetischen Kompartimenten. Eine fehlregulierte LYL1-Expression wurde mit aberranter Hämatopoese in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext leukämogener transkriptioneller Schaltkreise untersucht, bei denen veränderte Regulation Entwicklungsverläufe stören kann. Entsprechend ist LYL1 ein nützliches Ziel, um transkriptionsfaktorgetriebene Gennetzwerke zu analysieren, die für die Blutentwicklung und Modelle maligner Transformation relevant sind.
Lyl-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LYL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LYL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LYL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LYL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.