Plasmide CRISPR/Cas9 KO LXR beta/NER/NR1H2 (m): sc-423617

Présentation

Nr1h2 code le récepteur X du foie bêta (LXRβ/NER), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme régulateur transcriptionnel de l’homéostasie des lipides et du cholestérol. Dans les cellules murines, LXRβ forme des hétérodimères avec RXR afin de moduler des gènes impliqués dans le transport inverse du cholestérol, le métabolisme des acides gras et les programmes géniques inflammatoires, en intégrant les signaux métaboliques et de l’immunité innée. Cette voie recoupe la polarisation des macrophages, la biologie des adipocytes et les réponses neuro-inflammatoires, reliant l’activité de Nr1h2 à des mécanismes pertinents pour l’athérosclérose, les dysfonctionnements métaboliques et les phénotypes inflammatoires du SNC dans des modèles expérimentaux. Comme LXRβ influence des réseaux transcriptionnels dans de nombreux tissus, la perturbation de Nr1h2 est largement utilisée pour disséquer les interactions entre récepteurs nucléaires et la régulation génique dépendante des ligands.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LXR beta/NER/NR1H2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nr1h2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nr1h2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nr1h2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LXR beta/NER/NR1H2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nr1h2 pour l'étude de la signalisation de LXR beta/NER/NR1H2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nr1h2 essentiels à la fonction de LXR beta/NER/NR1H2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nr1h2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LXR beta/NER/NR1H2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LXR beta/NER/NR1H2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nr1h2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LXR beta/NER/NR1H2 plasmide HDR (m) et le LXR beta/NER/NR1H2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nr1h2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nr1h2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.