Plasmide Double Nickase (h) Lutropin β: sc-403297-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Lutropin β correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Lutropin β Double Nickase (h) et le plasmide Lutropin β Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LHB. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Lutropin β Antibody (C-6): sc-373941
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Lutropin β | sc-403297-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Lutropin β | sc-403297-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LHB code la sous-unité bêta de l’hormone lutéinisante (LH), une hormone glycoprotéique hypophysaire qui s’hétérodimérise avec la sous-unité alpha commune (CGA) pour former une LH biologiquement active. La LH sécrétée se lie au récepteur LHCGR à la surface des cellules cibles gonadiques et active la signalisation AMPc/PKA, entraînant la stéroïdogenèse, l’ovulation et la maturation des tissus reproducteurs au sein de l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique. L’expression de LHB est régulée par la libération pulsatile de l’hormone de libération des gonadotrophines (GnRH) et s’intègre aux rétrocontrôles exercés par les stéroïdes sexuels et les inhibines/activines afin de coordonner l’homéostasie endocrinienne de la reproduction. Une production ou une signalisation de la LH dérégulée est impliquée dans des troubles de la fonction gonadique et du développement reproducteur, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la régulation endocrinienne et des voies liées à la fertilité.
Lutropin β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LHB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LHB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LHB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LHB.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.