Lunatic Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421414
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Lunatic Fringe O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Lunatic Fringe, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Lunatic Fringe Anticorpo (TT-07): sc-100756
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Lunatic Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421414 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Lfng codifica a Lunatic Fringe, uma β1,3-N-acetilglucosaminiltransferase localizada no complexo de Golgi que modifica repetições do tipo fator de crescimento epidérmico (EGF) O-fucosiladas nos receptores NOTCH. Ao alterar as interações entre receptor Notch e ligantes, a Lunatic Fringe ajusta a intensidade do sinal de Notch e as dinâmicas oscilatórias que governam a segmentação dos somitos, a formação de limites e as decisões de destino celular durante o desenvolvimento do camundongo. A atividade de Lfng está ligada ao “relógio de segmentação” e a programas mais amplos dependentes de Notch, que influenciam a manutenção e a diferenciação de progenitores em múltiplos tecidos. A desregulação da modulação LFNG/Notch é relevante para defeitos de padronização do desenvolvimento e oferece um ponto de entrada mecanístico para estudar as contribuições da via Notch para fenótipos associados a doenças em sistemas modelo.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Lunatic Fringe (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Lfng em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Lfng, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Lfng na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Lunatic Fringe.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Lfng para a investigação da sinalização de Lunatic Fringe, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Lfng críticos para a função Lunatic Fringe
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Lfng para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Lunatic Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Lunatic Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Lfng. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Lunatic Fringe Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Lunatic Fringe (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Lfng para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Lfng definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.