LTRPC7CRISPR激活质粒(h): sc-402820-ACT

TRPM7（LTRPC7）编码一种双功能的通道-激酶，可传导二价阳离子，尤其是 Mg²⁺ 和 Ca²⁺，并通过其丝氨酸/苏氨酸激酶结构域将离子稳态与细胞内信号传导相耦联。TRPM7 的活性会影响膜电位、细胞骨架动态以及细胞黏附与迁移，并与调控增殖、分化和应激反应的通路整合。通过调控 Mg²⁺ 依赖的酶促过程及 Ca²⁺ 相关信号，TRPM7 参与细胞代谢与存活的控制。TRPM7 表达或功能失调与兴奋性改变及重塑程序相关，这些程序在多种神经损伤模型、心血管病理生理以及癌细胞表型中均有涉及，从而支持其作为功能基因组学中机制性靶点的应用价值。

LTRPC7 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TRPM7的表达。

LTRPC7 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TRPM7基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TRPM7转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性LTRPC7表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TRPM7位点，并能够研究内源性位点上依赖于LTRPC7的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TRPM7表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LTRPC7通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。