LTBP-3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421482-ACT

Ltbp3 kodiert das latente Transforming-Growth-Factor‑Beta‑Bindungsprotein 3 (LTBP‑3), ein Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das an latente TGF‑β‑Komplexe bindet und deren Sequestrierung, Aktivierung und räumliche Präsentation im Gewebemikromilieu reguliert. Durch die Kontrolle der TGF‑β‑Bioverfügbarkeit beeinflusst LTBP‑3 die SMAD‑abhängige Signalübertragung, den Umbau der Matrix sowie Zellschicksalsentscheidungen während der Entwicklung und der Gewebehomöostase. Mausstudien bringen LTBP‑3 mit der Skelettmusterung, der Integrität des Bindegewebes und der Gefäßbiologie in Verbindung, was seine Rolle bei der Kopplung von Wachstumsfaktor‑Signalgebung an die Organisation der extrazellulären Matrix widerspiegelt. Eine fehlregulierte Aktivität der LTBP‑3–TGF‑β‑Achse ist in mechanistischen Forschungszusammenhängen relevant für fibroseähnliches Remodelling, abnorme Osteogenese und tumorassoziierte Stromasignalgebung.

LTBP-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ltbp3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LTBP-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ltbp3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ltbp3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LTBP-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ltbp3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LTBP-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LTBP-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ltbp3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.