Plásmido Doble Nickase (h) LTBP-2: sc-403182-NIC

LTBP2 codifica la proteína de unión al factor de crecimiento transformante beta latente 2 (LTBP-2), una gran glucoproteína de la matriz extracelular que se asocia con las microfibrillas y contribuye al ensamblaje de las fibras elásticas y a la arquitectura de la matriz. Aunque no se une covalentemente al TGF-β latente de la misma manera que algunos otros miembros de la familia LTBP, LTBP-2 influye en el secuestro en la matriz extracelular y en la presentación de señales que convergen con vías relacionadas con TGF-β, la mecanotransducción y la remodelación tisular. Se expresa en tejidos conectivos, donde sostiene la integridad estructural de las matrices adyacentes a la membrana basal y regula las interacciones célula–matriz. La variación genética o la desregulación de LTBP2 se ha relacionado con trastornos que implican defectos oculares y del tejido conectivo, incluidos fenotipos asociados al glaucoma y anomalías en tejidos ricos en microfibrillas.

LTBP-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LTBP2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LTBP2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LTBP2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LTBP2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.