Plasmide CRISPR/Cas9 KO LTBP-1 (h): sc-402289

Présentation

LTBP1 code pour la latent transforming growth factor beta binding protein 1 (LTBP‑1), une glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui se lie au complexe latent du TGF‑β et en régule la séquestration, l’activation et la présentation spatiale aux cellules. En contrôlant la biodisponibilité du TGF‑β, LTBP‑1 influence la signalisation dépendante des SMAD et des programmes en aval impliqués dans le remodelage de la matrice, la transition épithélio‑mésenchymateuse, l’adhésion cellulaire et l’homéostasie tissulaire. La fonction de LTBP1 est étroitement liée à l’organisation des microfibrilles de fibrilline et à l’activation du TGF‑β régulée par des mécanismes mécaniques, reliant ainsi l’architecture de la matrice extracellulaire à la signalisation des cytokines. Une activité dérégulée de l’axe LTBP1/TGF‑β est impliquée dans le remodelage associé à la fibrose, la signalisation stromale associée au cancer et la pathobiologie vasculaire et du tissu conjonctif, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes pilotés par le microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LTBP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LTBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LTBP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LTBP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LTBP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LTBP1 pour l'étude de la signalisation de LTBP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LTBP1 essentiels à la fonction de LTBP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LTBP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LTBP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LTBP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LTBP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LTBP-1 plasmide HDR (h) et le LTBP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LTBP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LTBP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.