LT-β Plasmide Double Nickase (m): sc-421479-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LT-β Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LT-β Double Nickase Plasmid (m) e il LT-β Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ltb. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LT-β Plasmide Double Nickase (m) | sc-421479-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LT-β Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421479-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ltb codifica la linfotossina-β (LT-β), una proteina di membrana di tipo II della superfamiglia del TNF che forma complessi di linfotossina eterotrimerici con LT-α e si lega al recettore della linfotossina-β (LTβR). La segnalazione mediata da LTβR attiva le vie canonica e non canonica di NF-κB per regolare l’espressione di chemochine, la differenziazione delle cellule stromali e l’organizzazione dei tessuti linfoidi secondari, inclusa la microarchitettura dei linfonodi e della milza. Nell’immunità del topo, LT-β contribuisce alla formazione dei follicoli delle cellule B, al posizionamento delle cellule dendritiche e al mantenimento delle nicchie immunitarie mucosali attraverso un rimodellamento coordinato dei tessuti linfoidi. L’alterazione della segnalazione di Ltb è comunemente utilizzata per modellare difetti dell’organogenesi linfoide e per indagare fenotipi infiammatori e simil-autoimmuni legati a una segnalazione NF-κB deregolata e alla neogenesi linfoide.
LT-β Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ltb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ltb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ltb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ltb interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.