LSm1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403980-ACT

O LSM1 humano codifica a LSm1, uma proteína de ligação a RNA do tipo Sm que se monta no complexo citoplasmático LSM1–7 para regular a renovação (turnover) do mRNA. A LSm1 promove a degradação do mRNA no sentido 5′→3′ ao favorecer o desencapeamento (decapping) e ao coordenar-se com os P-bodies, moldando assim a estabilidade dos transcritos e programas de expressão gênica ligados à proliferação e às respostas ao estresse. Por meio de seu papel no controle pós-transcricional, alterações na atividade de LSM1 podem influenciar vias associadas à transformação oncogênica e ao metabolismo de RNA desregulado, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de estados de expressão gênica associados a doenças. A LSm1 também é utilizada como marcador e nó funcional para investigar defeitos no processamento de RNA e seus impactos a jusante no comportamento celular.

LSm1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LSM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LSm1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LSM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LSM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LSm1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LSM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LSm1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LSm1 em células tumorais com expressão de LSM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.