Plasmide Double Nickase (h) Lsh: sc-402466-NIC

HELLS code pour Lsh (hélicase spécifique des tissus lymphoïdes), un remodeleur de la chromatine dépendant de l’ATP de la famille SNF2, qui favorise le maintien de la méthylation de l’ADN et la formation d’hétérochromatine en facilitant l’accès des DNMT et d’autres régulateurs épigénétiques à l’ADN nucléosomal. Lsh contribue à l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication, à la répression transcriptionnelle des éléments répétitifs et au maintien de la stabilité du génome via des effets sur la compaction de la chromatine et des processus associés à la réparation de l’ADN. La dérégulation de HELLS a été associée à des profils aberrants de méthylation de l’ADN, à une altération du contrôle du cycle cellulaire et à des phénotypes d’instabilité génomique observés dans des troubles du développement ainsi que dans des études de remodelage épigénétique liées au cancer. En tant que facteur nucléaire de la chromatine, Lsh est fréquemment étudiée dans des voies reliant l’hérédité épigénétique, le silence des transposons et les réponses au stress de réplication.

Lsh Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HELLS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HELLS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HELLS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HELLS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.